产品对于鸡肉,猪肉,鸭子

LSY-10042 Dexamethasone ELISA测试套件

dexamethasone elisatestkit.

目录号LSY-10042

1. Principle

该测试试剂盒基于竞争性酶免疫测定 用于检测样品中的地塞米松。偶联抗原在微阱条上预涂覆。地塞米松 in the sample and the coupling 抗原预涂在微孔条纹上 compete for 抗地塞米松抗体。在加入酶缀合物后,加入TMB底物用于着色。样品的光密度(OD)值与地塞米松的负相关性 在里面。将该值与标准曲线和地塞米松浓度进行比较 随后获得。


2.技术规格

Sensitivity: 0.1ppb

孵化温度: 25℃

Incubation Time:  30min ~15min

Detection limit:

Tissue 0.1 ppb

饲料,牛奶,蜂蜜,尿液0.2 ppb

牛奶粉0.3 ppb.

交叉反应速率:

Dexamethasone 100%

Recovery rate

组织,进给90±25%

Milk powder 85±25%

尿液,牛奶,蜂蜜..................................................................。 95±25%


3. Components

1

微井条

12条带8个可拆卸

 wells each

2

6×标准解决方案(每次1ml)

0ppb

0.1ppb

0.3ppb

0.9ppb

2.7ppb

8.1ppb

3

酶共轭

7ml

red cap

4

抗体工作解决方案

7ml

blue cap

5

Substrate A

7ml

white cap

6

SubstrateB

7ml

black cap

7

Stop solution

7ml

yellow cap

8

20×浓缩洗涤缓冲液

40ml

white cap

9

5×集中重新溶解溶液

50ml

透明盖帽















4.所需的材料但未提供

1) 设备:微孔板读卡器,均化器,氮气干燥装置,涡旋,离心机,测量移液管和平衡(互感互惠0.01 g),孵化器,打印机。

2) Micropipettors: 单通道20-200 µL, 100-1000 μl,多通道30〜300μl。

3) Reagents: Ethyl 乙酸盐,乙腈 (CH3CN), N-hexane.


5. Sample pre-treatment 

Instructions

The following 在预处理之前必须处理积分 of any kind of sample:

1)  只有一次性尖端可用于实验,并且当用于吸收不同的试剂时,必须改变尖端;

2)  在实验之前,必须检查每个实验设备清洁和 应在必要时重新清理,以避免 干扰实验结果的污染。

溶液制备备注样品 pre-treatment 

1) Acetonitrile and Ethyl acetate 混合溶液:1份乙腈 + 1 part Ethyl acetate

2) Sample redissolving solution: 5×集中的重新溶解溶液 用去离子水稀释 at 1:4.

5.1 Tissue

1. Take 2.0 ± 0.05 g 将均化的样品进入50ml离心管;添加2ml样本重新定位 溶液,然后加入6ml乙基 醋酸盐,摇动3分钟,在4000以上的离心机 在15℃下r / min 10分钟。

2. Take 3mL clear organic phase 进入干燥的容器,吹干 by nitrogen or air in 50-60℃.

3. Dissolve the dry 1ml N-己烷中残留物,添加 1 mL of the sample 重新溶解的解决方案,混合30秒; 在4000以上的离心机 r/min 在15℃下10分钟,取出上层正己烷 phase.

4. Take 50 µL 分析的下层。

稀释样品的折叠:1

5.2 Feed

1.  Weigh 1.0±0.05g homogenized feed sample into 50ml centrifuge tube, add 6ml ethyl acetate, shake for 3 min, 在4000以上的离心机 r/min at 15 ℃ for 10 min.

2.  服用3毫升透明有机相 进入干燥的容器,在50-60℃下用氮气或空气吹干。

3. 溶解1的干残留物 ml正己烷,加入1ml样品 redissolving solution, mix for 30 seconds, 在4000以上的离心机 r/min at 15℃ 10分钟,去除上层正己烷 phase.

4. Take 50 μl下层液体以进一步分析。

样品稀释折叠:2

5.3 Milk powder

1. Weigh 1.0 ± 0.05 g 奶粉成50ml离心管,加入2ml样品重新溶解 溶液,然后加入6ml乙腈 and Ethyl acetate 混合溶液,摇动3min,离心4000 r/min at 15℃ for 10 min.

2. 服用2ml清晰的有机阶段 进入干燥的容器,吹干 with nitrogen or air at 50-60℃.

3. 溶解2ml中的干残留物 N-己烷,加1ml样品 redissolving solution, mix for 20 seconds, 在4000以上的离心机 r/min at 15℃ 10分钟,去除上层正己烷 phase.

4. Take 50 µL 用于进一步分析的下层液体。

稀释样品的折叠:3

5.4 Honey

1. Weigh 1.0±0.05 g 蜂蜜进入50ml离心管,加入2ml样品重新溶解 溶液,然后加入6ml乙基 醋酸盐,摇动3分钟。在4000以上的离心机 r/min at 15℃ for 10 min.

2. 服用3ml清晰的有机阶段 进入干燥的容器,吹干 with nitrogen or air at 50-60℃.

3. 溶解1的干残留物ml N-己烷,加1ml样品 redissolving solution, mix for 30 seconds, 在4000以上的离心机 r/min at 15℃ 10分钟,去除上层正己烷 phase.

4. Take 50 µL 用于进一步分析的下层液体。

稀释样品的折叠: 2

5.5 Urine

1. 将1.0ml尿液样品进入5ml离心管,加入2ml乙基 acetate, shake for 1min, 在4000以上的离心机 r/min at 15℃ for 10 min.  

2. 服用1ml清晰的有机阶段 进入干燥的容器,吹干 with nitrogen or air at 50-60℃.

3. 溶解1的干残留物ml N-己烷,加1ml样品 redissolving solution, mix for 30 seconds, 在4000以上的离心机 r/min at 15℃ 10分钟,去除上层正己烷 phase.

4. Take 50 µL 用于进一步分析的下层液体。

样品稀释折叠:2

5.6 Milk

1.  Take 1.0ml牛奶样品进入5ml离心管,加入2ml乙腈 and Ethyl acetate mixing solution, shake for 1min, 在4000以上的离心机 r/min at 15℃ for 10 min.

2. 服用1ml清晰的有机阶段 进入干燥的容器,吹干 with nitrogen or air at 50-60℃.

3. 溶解1的干残留物ml N-己烷,加1ml样品 redissolving solution, mix for 30 seconds, 在4000以上的离心机 r/min at 15℃ 10分钟,去除上层正己烷 phase.

4. Take 50 µL 用于进一步分析的下层液体。

样品稀释折叠:2


6. ELISA程序

6.1Instructions 

1 带来所有试剂和 micro-well strips to the 室温(20-25 ℃) before use;

2 Return all reagents to 2-8 ℃ immediately after use;

3 The reproducibility ELISA分析到大程度上取决于板材洗涤的一致性。这 正确的板材洗涤操作是关键点 in ELISA the procedures;

4 为了在恒定温度下孵育,所有样品和试剂必须避免曝光,每个样品和试剂 microplate 应由覆盖膜密封。 

6.2Operation procedures

1. 从套件中取出所有必要的试剂 and place at the 室温(20-25 ℃) for at least 30 min. Note that 每种试剂都必须摇摇欲坠 在使用前均匀混合。

2. 采取所需的微孔 条带和板框架。重新密封 未使用的微孔板,在2-8℃储存,不冷冻。

3. 溶液制备:稀释 15毫升浓缩洗涤 buffer (20 × 用去离子水浓缩 1:19(20倍浓缩洗涤的1部分 缓冲+ 19份去离子水),或准备为数量 needed.

4. Numbering: number 根据样品的微孔 和标准解决方案;应执行每个样品和标准解决方案 重复,记录他们的 positions.

5. 加入50μL样品或标准溶液分开 重复井;并添加50ul /孔的酶共轭, 然后添加抗体工作溶液, 50μl/孔。通过手动摇动板轻轻混合,用盖膜密封微孔板,And incubate At25 ℃ for 30 min.

6. 倒入液体,用洗涤缓冲液洗涤微孔板 at 250 μl/孔4-5次。每次浸泡 与洗涤缓冲液吻合良好 for 15-30 sec, flap to dry with absorbent 纸张(如果有气泡之后 拍打,用干净的提示切割它们)。

7. Coloration: add 50 µL of the substrate A solution and then 50 µL of the B 溶液进入每个孔。通过手动摇动板,在25℃下摇晃轻轻混合 ℃ for 15minatdark for coloration.

8. 确定:加50 µL of the stop solution 进入每个井。通过手动摇动板轻轻混合。放 the wavelength 450的微孔板读者 nm 确定OD值。 (推荐 阅读OD值 the dual-wavelength 450/630 nm within 5 min).


7. Result judgment

There are two methods to 判断结果;第一个是粗略的判断力,而第二个是定量确定。注意,样品的OD值与 the content of Dexamethasone.

7.1 定性决定

浓度范围(Ng / ml) 可以从比较中获得平均OD值 样本与那个 standard 解决方案。假设这一点 OD value of the sampleⅠ 是0.3,Ⅱ样品 是1.0,而那些标准 解决方案如下:2.243为0 PPB,1.816 0.1 PPB, 1.415对于0.3 ppb,0.74 for 0.9 ppb,0.313 2.7 ppb 和8.1 ppb为0.155,因此浓度范围 样品Ⅰ的2.7至8.1 ppb,以及试样 is 0.3 to 0.9 ppb.

7.2 定量决定

获得的吸光度值的平均值 average OD 样品的值(b)和标准 解决方案除以 第一标准解决方案的OD值(B0)(0 标准)随后乘以100%,即


吸光度值的百分比=

B

×100%

 B0

B—the average OD 样品的值或标准 solution

B0—the average OD value of the 0ng/mL standard solution

用吸收绘制标准曲线 标准的百分比 解决方案和半因素 地塞米松的价值 标准溶液(Ng / ml) 作为y和x轴分别。从标准曲线读取样品的相应浓度 通过纳入其吸收 标准曲线的百分比。随后产生的值 乘以相应的稀释折叠,因此最终 obtaining  the Dexamethasone concentration in the sample.

Using 专业分析软件 of this kit 会更方便 for the accurate and 快速分析大量样品。 (请与我们联系此软件)。


8. Precautions

1. 室温低于25℃以下或试剂的温度,并没有返回样品 to the 室温(20-25 ℃)将导致较低的标准OD value.

2. 洗涤过程中微孔板的干燥度 将伴随着陪同 situations including 非线性标准曲线和不期望的再现性。

3. Mix 每种试剂和反应混合物均匀并洗涤微孔板 彻底,否则会有不良的再现性。

4. 停止解决方案是2 M硫酸溶液,避免 contacting with the skin;

5. 将未使用的微孔板放入自动密封袋中以重新密封。标准物质 and the colourless 彩色剂是光敏感,因此它们不能直接暴露在光线上。

6. Do not use the kit 超过其到期日。这 使用试剂盒中的稀释剂或掺假试剂将导致灵敏度的变化 and the detecting OD values. 不要将试剂从不同的套件交换 lot numbers to use.

7. 丢弃着色  溶液用任何颜色 表明退变性 这个解决方案。标准的检测值 溶液1(0 ppb)小于0.5表示其变性。

8. The 最佳反应温度为25 ℃,温度过高或太低 will result in the changes 在检测灵敏度和OD值中。


9. 存储和满足日期

Storage: store at 2-8 ℃, not frozen.

Expiry date: 12个月;生产日期在框中。

注意:如果微孔板的真空包装有泄漏,则使用仍然有效,不影响测试结果,放松使用。


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