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LSY-10021 Diazepam ELISA测试套件

Diazepam Elisa测试套件

目录号LSY-10021

1. Principle

该测试试剂盒基于竞争性酶免疫测定,用于检测饲料中的DiazeMaam, urine, liver and meat. 偶联抗原在微阱条上预涂覆。样品中的二嗪泮和预涂在微阱条纹上的偶联抗原竞争抗二氮酸泮 抗体。在加入酶缀合物后,加入TMB底物用于着色。样品的光密度(OD)值与DiazePam具有负相关性 在里面。将该值与标准曲线和Diazexam进行比较 随后获得浓度。


2.技术规格

Sensitivity: 0.1 ppb

Detection limit

Tissue 1 ppb

Urine 1 ppb

Feed 10 ppb

Recovery rate

Urine 80 ±10%

Feed 75 ±10%

组织(肉,肝脏)85±10%

交叉反应率

Diazepam 100%

Nitrazepam 7.6%

Oxazepam 8.8%


3. Components

1) 微井条:12条带有8个可拆卸井

2) 6×标准溶液(每次1毫升):0 ppb,0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1 ppb

3) 酶缀合物(12ml)红色帽

4) 抗体工作溶液(7mL)蓝帽

5) 底物溶液(7 mL) white cap

6) 底物B溶液(7 mL) black cap

7) Stop solution (7 mL) yellow cap

8) 20×浓缩洗涤缓冲液(40mL)白色帽

9) 2×浓缩重新溶解溶液(50mL)透明帽


4.所需的材料但未提供

1) 设备:微孔板读卡器,打印机,均化器,氮气干燥装置,votex,离心机,测量移液,平衡(互感互惠0.01g)。

2) Micropipettors: 单通道20至100μL和200至1000μL,而多通道250μL。

3) Reagents: 正己烷,NaOH,二氯甲烷(CH 2 Cl 2),CH 3 CN。


5.样品预处理

指令(在预处理前必须处理以下几点)

1) 只有一次性尖端可用于实验,并且当用于吸收不同的试剂时,必须改变尖端;

2) 在实验之前,每个实验器具必须清洁,如果需要,应避免干扰实验结果的污染。


样品预处理前的溶液制备:

1) 0.1 M NaOH: 在100中溶解0.4克NaOH mL deionized water.

2) 1 M NaOH: 溶解4克NaOH 100 mL deionized water.

3) 2 M NaOH: dissolve 8 g NaOH in 100 mL deionized water.

4) 将2×浓缩的重新溶液溶液在1:1(1ml浓缩的重新溶液+ 1mL去离子水)下与去离子水混合,用于处理过的样品。

5)  N-hexane-CH2Cl2 solution: ⅤN-hexane:ⅤCH2Cl2 = 5:3.


5.1动物组织(肉,肝脏)

1. 取样品,在10000 r / min均匀化1分钟,

2. 称重2±0.05g均质化样品,进入50ml离心管,加5 ML CH3CN,1mL 2 M NaOH,摇匀10分钟,在10℃下在4000升4000℃下离心10分钟,

3. 将3ml上清液(上层)取入新的离心管,加200 µL 2 M NaOH, 6 mL N-hexane-CH2Cl2 溶液,摇动10分钟,并在20-25℃下在4000升/分钟以上离心5 min,

4. Static for 5-10 分钟,将所有上清液转移到新的离心管中,吹干与氮气干燥,

5. 在1ml稀释的重新溶解溶液中稀释残留物,

6. 取样品溶液,稀释1:9 ( 50 μl样品溶液+ 450 μl稀释的重新溶解溶液),

7. 需要50μl以进一步分析。

样品稀释折叠:10   检测限:1 ppb


5.2 Urine

1. 将1毫升透明样品加入50ml离心管中,加入4ml 0.1米NaOH,摇匀2-5分钟,

2. 将1mL液体转移到另一个中心管中,加入10ml正己烷,摇动5分钟,并在20-25℃下在4000升4000℃下离心5分钟,

3. 将5ml上清液转移到新的离心管中,用氮气吹干,吹干,

4. 用1ml稀释的重新溶解溶液稀释,

5. 需要50μl以进一步分析。

样品稀释折叠:10   检测限:1ppb


5.3 Feed

1. 将1.0±0.05g进给成50ml离心管,加入6ml去离子水和1ml 1 m NaOH,涡旋1分钟,加入6ml正己烷-CH2Cl2 溶液(5:3),搅拌10分钟,在室温下以上4000升/分钟离心5分钟,

2. 服用3ml上清液(上层),在50℃下吹干,用氮气干燥,

3. 用1mL稀释的重新溶解溶液稀释。

4. 稀释:1:49(10μl样品+ 490μL稀释的重新溶解溶液)。

5. 需要50μl以进一步分析

样品稀释折叠:100   Detection limit: 10 ppb

注意:我们推荐标准3因为一些干扰而被切断。


6. ELISA程序

6.1 Instructions

1. 在使用前将所有试剂和微孔条带到室温(20-25℃)。

2. 将所有试剂归还为2-8℃ 使用后立即。

3. ELISA分析到大程度的再现性取决于板材洗涤的一致性。板材洗涤的正确操作是ELISA程序中的关键点。

4. 为了在恒定温度下孵育,所有样品和试剂必须避免光暴露,并且每个微孔板应由覆盖膜密封。


6.2操作程序

1. 从冷藏环境中取出套件。从套件中取出所有必要的试剂,并在室温(20-25℃)的地方至少30 分钟。注意,必须在使用前摇动每种液体试剂以均匀混合。

2. 采用所需的微孔条和板式框架。重新密封未使用的微孔板,储存在2-8℃,不冷冻。

3. 溶液制备:用蒸馏水或去离子水稀释20×浓缩洗涤缓冲液至800ml(或仅适用于所需的体积)。

4. 编号:根据样品和标准溶液编号微孔;每个样品和标准溶液应重复进行;记录他们的职位。

5. 将50μL样品或标准溶液加入分离孔,将50μl抗体工作溶液加入每个孔中。用盖膜密封微孔板,并在37℃下孵育 for 30 min.

6. 倒入mirowell中的液体,加入250μl/孔的洗涤缓冲液10秒,重复四到五次。皮瓣用吸收剂晾干 纸张(如果拍打后有气泡,请用清洁的提示切割它们)。

7. 将100μL酶缀合物加入到每孔中,用盖膜密封微孔板,在37℃孵育 30分钟,继续如6所述。

8. 着色:加入50μl底物溶液和50 μlb溶液进入每个孔中。通过手动摇动板轻轻混合,用盖膜密封微孔板,并在37℃下孵育 在黑暗中为较为着色的15分钟。

9. 测定:在每个孔中加入50μl停止溶液。通过手动摇动板轻轻混合。将微孔板读取器的波长设置为450 nm以确定OD值(建议在5分钟内读取双波长450/630 nm处的OD值) 


7. Result judgment

有方法可以判断结果;第一个是粗略的判断力,而第二个是定量确定。注意,样品的OD值与Diazepam的含量具有负相关性。


7.1定性确定

浓度范围(Ng / ml)可以从比较的平均OD值获得

用标准Solutin的样品。假设样品的OD值Ⅰ 是0.211,样品Ⅱ 是0.785,标准Solutins的OD值为:2.100持续0 PPB,1.580为0.1 ppb,1.010 for 0.3 ppb, 0.580 for 0.9 ppb, 0.308 for 2.7 ppb, 0.120 for 8.1 因此,PPB,样品的浓度范围Ⅰ 是2.7〜8.1 ppb,以及样品Ⅱ 是0.3至0.9 ppb。 (乘以相应的稀释折叠)


7.2 Quantitative determination

对样品的平均OD值(B)获得的吸光度值的平均值和标准溶液除以第一标准解决方案(0标准)的OD值(B0),随后乘以100%,即

吸光度值的百分比=

B

×100%

B0

B-样品的平均OD值或标准解决方案

B0 - 0NG / ML标准解决方案的平均OD值

用标准Solutins的吸收百分比和半因素值绘制标准曲线 Diazepam 标准溶剂蛋白(Ng / ml)分别为y和X轴。通过将其吸收百分比掺入标准曲线中,从标准曲线读取样品的相应浓度。随后将得到的值乘以相应的稀释折叠,因此最终获得了Diazepam 样品中的浓度。

使用此套件的专业分析软件将更方便地对大量样品进行准确和快速分析。 (请联系我们此软件)


8. Precautions 

1. 室温低于20℃或试剂的温度,并且未返回室温(20-25℃)的样品将导致较低的标准OD值。

2. 洗涤过程中微孔板的干燥将伴随着包括非线性标准曲线的情况和不希望的再现性;所以洗完后继续下一步。

3. 混合均匀,否则会有不良的再现性。

4. 静止溶液是2M硫酸溶液,避免与皮肤接触。

5. 请勿使用超出其到期日的套件。使用来自试剂盒的稀释剂或掺杂试剂将导致灵敏度的变化和检测到的OD值。不要将试剂从不同批号的套件交换使用。

6. 将未使用的微孔板放入自动密封袋中以重新密封。标准物质和无色彩色成形器是光敏感的,因此它们不能直接暴露在光线上。

7. 用任何指示该溶液退化的颜色丢弃着色溶液。 0标准Solutin的检测值小于0.5(A450nm<0.5)表示其变性。

8. Colouration时间约为15分钟,如果颜色是光,延长着色时间但不超过30分钟。

9. 最佳反应温度为25℃,过高或低温会导致检测灵敏度和OD值的变化。


9.存储和到期日期

Storage: 存放在2-8℃,不冷冻。

Expiry date: 12 几个月;生产日期在框中。



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