产品对于鸡肉,猪肉,鸭子

LSY-10025 OLAQUINDOX ELISA测试套件

Olaquindox ELISA Test Kit

目录号LSY-10025

1. Principle

该测试试剂盒基于竞争性酶免疫测定用于检测Olaquindox in the sample. 偶联抗原 are 预涂在微孔条纹上。 Olaquindox. 在样品和偶联抗原中 预涂在微阱条纹上,竞争抗Olaquindox抗体。在加入酶缀合物后,加入TMB底物用于着色。样品的光学密度(OD)值与其中的Olaquindox具有负相关性。将该值与标准曲线进行比较,随后获得OlaquIndox浓度。


2.技术规格

Sensitivity:0.2 ppb

培养箱温度:37℃

Incubator time:  30min~30min~15min

Detection limit:

Pork, chicken 0.2 ppb

Porcine liver 1 ppb

Feed 20 ppb

交叉反应速率:

Olaquindox 100%

Carbadox <7%

Recovery rate:

Tissue 95%±25%

Feed 70%±20%


3. Components

1

微井条

12条带8个可拆卸

 wells each

2

6×标准溶液(每个1毫升)

0ppb

0.2ppb

0.6ppb

1.8ppb

5.4ppb

16.2ppb

3

酶共轭

12ml

red cap

4

抗体工作解决方案

7ml

blue cap

5

Substrate A

7ml

white cap

6

SubstrateB

7ml

black cap

7

Stop solution

7ml

yellow cap

8

20×浓缩洗涤缓冲液

40ml

white cap

9

2×集中重新溶解溶液

50ml

透明盖帽


4.所需的材料但未提供

1) 设备:微孔板读卡器(450nm / 630nm),均化器,振荡器,离心机,测量移液管,氮干燥装置 和平衡(敏感性互惠0.01g),培养箱。

2) Micropipettors: 单通道20至200μl和100至1000μL和多通道30〜300μL;

3) 试剂:乙腈, N-hexane, Al2O3

5.样品预处理

Instructions

必须在任何类型的样本预处理之前处理以下几点:

1) 只有一次性尖端可用于实验,并且当用于吸收不同的试剂时,必须改变尖端;

2) 在实验之前,必须检查每个实验器具清洁,如果需要,应重新清洁,以避免干扰实验结果的污染。

Sample preparation

1)  样品重新溶解溶液:稀释2×浓缩的重新溶解溶液 在1:1的去离子水

5.1tissues(鸡肉,猪肉/肝脏) 

1. 将2±0.05g均质化样品进入 50ml centrifuge 管,加入10ml乙腈 (没有水),摇动2min。在室温(20-25℃)的4000r / min上以上离心10min。

2. 取5ml上清液,用氮气吹干 or air at 56℃.

3. 将干燥残余物溶解在2ml正己烷中, 加入1ml稀释的重新溶解溶液,彻底混合 for 30s, 在室温(20-25℃)的4000r / min上以上的离心机5分钟。取出上层N-己烷 phase.

4. 需要50μl进行分析。

稀释样品的折叠:1        

5.2Feed

1. 称重1±0.05g均质化 sample 进入离心管,加入2g al2O3 然后5ml乙腈,猛烈摇晃 对于3分钟,在4000r / min以上的离心机5min; 

2. 采取50ul上清液,混合950ul稀释的重新溶液溶液均匀,需要50μl up-layer liquid for analysis.

样品稀释折叠:100   


6.ELISA procedures

6.1 Instructions

1) 使用前将所有试剂和微孔条带到室温(20-25℃)之前;

2) 将所有试剂归还为2-8℃ 使用后立即;

3) ELISA分析到大程度的再现性取决于板材洗涤的一致性。板材洗涤的正确操作是ELISA程序中的关键点;

4) 为了在恒定温度下孵育,所有样品和试剂必须避免光暴露,并且每个微孔板应由覆盖膜密封。

6.2操作程序

1) 在室温(20-25℃)中取出所有必要的试剂,至少30分钟。请注意,必须在使用前摇动每种试剂以均匀混合;

2) 采用所需的微孔条和板式框架。重新密封未使用的微孔板,储存在2-8℃。

3) 溶液制备:用去离子水稀释40×浓缩洗涤缓冲液 AT1:19(1部分20×浓缩洗涤缓冲液 + 19份去离子水),或准备需要的量;

4) 编号:根据样品和标准溶液编号微孔;每个样品和标准溶液应重复进行;记录他们的职位;

5) 将50μl样品或标准溶液加入分离孔,然后将50μl抗体工作溶液加入每个孔中。通过轻轻摇晃,用盖膜密封微孔板,并在37℃下孵育 for30 min;

6) 用250μl/孔用洗涤缓冲液洗涤微孔板四至五次; 用洗涤缓冲液浸泡15-30 秒,用吸收纸拍打(如果拍打后有气泡,用清洁的尖端切割);

7) Add 100 µL Enzyme conjugate 到每个孔,用轻柔的摇晃, 用盖膜密封微孔板,并在37℃下孵育 for30 min; 倒入井中的液体,用洗涤缓冲液洗涤微孔板,继续为步骤6)。

8) 着色:将50μl底物溶液和50μl的B溶液加入每个孔中。通过轻轻摇晃,并在37℃孵育 ℃ for15 Min在黑暗中为着色;

9) 测定:在每个孔中加入50μl停止溶液。通过轻轻摇晃。将微孔板读取器的波长设置为450nm以确定OD值。 (建议在5分钟内读取双波长450 / 630nm的OD值) .


7. Result judgment

有两种方法来判断结果;第一个是粗略的判断力,而第二个是定量确定。注意,样品的OD值与Olaquindox的含量具有负相关性。

7.1定性确定

浓度范围(Ng / ml)可以从比较样品的平均OD值与标准溶液的比较获得。假设样品的OD值Ⅰ 是0.3,以及样品Ⅱ 是1.0,而标准解决方案的介绍是如下:2.243 for 0ppb, 1.816 for 0.2ppb, 1.415 for 0.6ppb, 0.74 for 1.8ppb, 0.313 for 5.4ppb and 0.155 对于16.2ppb,因此提取样品的浓度范围5.4 到16.2ppb,以及样品Ⅱ is 0.6 to 1.8ppb.

7.2定量确定

吸光度值的平均值相当于样品的平均OD值(B)的百分比,并将标准溶液除以第一标准溶液(0标准)的OD值(B0),随后乘以100% , 那是,

吸光度值的百分比=

B

×100%

B0

B-样品的平均(双孔)OD值或标准溶液

B0- 0 NG / ML标准溶液的平均OD值

将标准曲线与标准溶液的吸收百分比和Olaquindox标准溶液(Ng / ml)的半径值分别作为Y和X轴的吸收百分比。通过将其吸收百分比掺入标准曲线中,从标准曲线读取样品的相应浓度。随后将得到的值乘以相应的稀释折叠,因此最终获得样品中的Olaquindox浓度。

使用此套件的专业分析软件将更方便地对大量样品进行准确和快速分析。 (请联系我们此软件)


8. Precautions

1. 房间温度低于25 ℃或试剂的温度,并没有返回室温(20-25℃)的样品将导致较低的标准OD值

2. 洗涤过程中微孔板的干燥将伴随着包括非线性标准曲线的情况和不期望的再现性

3. 将每种试剂和反应混合物均匀混合并彻底清洗微孔板, 否则会有不良的再现性

4. 静止溶液是2米硫酸溶液,避免与皮肤接触;

5. 将未使用的微孔板放入自动密封袋中以重新密封。标准物质和无色彩色成形器是光敏感的,因此它们不能直接暴露在光线上

6. 请勿使用超出其到期日的套件。使用来自试剂盒的稀释剂或掺杂试剂将导致灵敏度的变化和检测到的OD值。不要将试剂从不同批号的套件交换使用

7. 用任何指示该溶液退化的颜色丢弃着色溶液。 0标准溶液的检测值小于0.5表示其变性

8. 最佳反应温度为37℃,温度过高或过低会导致检测灵敏度和OD值的变化。


9.存储和到期日期

Storage: 存放在2-8℃,不冷冻。

Expiry date: 12个月;生产日期在框中。

注意:如果微孔板的真空包装有泄漏,则使用仍然有效,不影响测试结果,放松使用。


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