产品对于鸡肉,猪肉,鸭子

LSY-10007氯霉素(帽)ELISA试剂盒(组织,鸡蛋)

氯霉素ELISA检测试剂盒(组织,鸡蛋)

目录号LSY-10007

1. Principle

该测试套件基于IndiRect竞争酶免疫测定 用于检测样品中的氯霉素。预涂在微阱条纹上的偶联抗原。氯霉素 in the sample and the coupling 抗原预涂在微孔条纹上 compete for 抗氯霉素含量。在加入酶缀合物后,加入TMB底物用于着色。样品的光密度(OD)值与氯霉素具有负相关性 在里面。将该值与标准曲线和氯霉素浓度进行比较 随后获得。

 

2.技术规格

Sensitivity: 15 ppt

孵化温度: 25℃

Incubation Time:  30min~15min 

Detection limit:

组织(method 1)7.5ppt

Tissue(method 2) 15ppt

Egg 15ppt

Recovery rate

Tissue, egg95±25%

交叉反应速率:

氯霉素100%

Thiamphenicol< 0.1%

Florfeniol< 0.1%

 

3. Components

1

微井条

12条带8个可拆卸

 wells each

2

7×标准解决方案(每个1ml)

0ppt

15ppt

45ppt

135ppt

405ppt

1215ppt

 10ppb

3

酶共轭

7ml

red cap

4

抗体工作解决方案

7ml

blue cap

5

Substrate A

7ml

white cap

6

SubstrateB

7ml

black cap

7

Stop solution

7ml

yellow cap

8

20×浓缩洗涤缓冲液

40ml

white cap

9

2×集中重新溶解溶液

50ml

透明盖帽

 

4.所需的材料但未提供

1) 设备:微孔板读卡器,均化器,氮气干燥装置,涡旋,离心机,测量吸管,antbalance(渐象性反比量0.01 g), incubator.

2) Micropipettors: 单通道20-200 µL, 100-1000 μl,和频道30〜300μl。

3) Reagents: Ethyl 乙酸盐,正己烷,NaOH,K2HPO4·3H 2 O,HCl。

 

5. Sample pre-treatment 

Instructions

Thefollowing 倾向于驳回预处理 ofany kind ofsample:

1)  只有在使用的前石吸收剂试剂时,才能用于实验,尖端必须改变尖端;

2)  在实验之前,必须检查每个小程序的PEREAN和 应该重新清理,如果要避免 污染在实验结果中有口腔干扰。

溶液制备备注样品 pre-treatment 

1) Sample redissolving solution: The2×集中重新调整oldingsolution 被稀释的水稀释 at 1:1.

5.1 Tissue (鸡,鸭,猪肉,鱼,虾,牛肉,羊肉) Method 1

1. Take 3± 0.05 g 将均化的样品进入50ml离心管。首先加入3ml去离子水,然后加入6ml甲基 醋酸盐,摇匀1分钟,在4000升中离心 r / minat室温(20-25℃)for5 min.

2. 服用4ml上清液,吹到干横亚硝 in50-60℃.

3. Dissolve thedry residues in1 mL 正己烷,添加 1 mL ofthesample Redissolvingsololution,混合30秒; 离心高于4000. r/min at 室温(20-25℃) for 10 min, remove这 up-layer organic phase.

4. Take50 µL 分析的下层。

稀释样品的折叠:0.5

(如果在样品制备期间不能服用4ml上清液,则重复离心机然后采用溶液,或加入9ml乙基 然后服用6ml上清液吹干,稀释因子相同)

5.2Tissue (鸡,鸭,猪肉,鱼,虾,牛肉,羊肉) Method 2

1. Take2± 0.05 g 将均化的样品进入50ml离心管。首先加入3ml去离子水,然后加入6ml甲基 醋酸盐,摇匀1分钟,在4000升中离心 r / minat室温(20-25℃)for5 min.

2. 拿出3ml的上清液,吹到干横核 in50-60℃.

3. Dissolve thedry 残留物IN1 MLN-己烷,添加 1 mL ofthesample Redissolvingsololution,混合30秒; 离心高于4000. r/min 在室温(20-25℃)of5 分钟,去除上层有机相。

4. Take50 µL 分析的下层。

稀释样品的折叠:1

(如果在样品制备过程中不能服用3ml上清液,则重复离心机然后采取溶液,或加入10ml乙基 然后服用5ml上清液吹干,稀释因子相同)

5.3其他组织样品具有高脂肪含量(肾,肝,肠,皮肤,心脏,猪肚等) 

1. Take2± 0.05 g 将均化的样品进入50ml离心管.Add10ml正己烷,摇动3 Min,在4000升中离心 r / minat室温(20-25℃)for5 Min,Discardn-己烷。

2. Add 6mLethyl 醋酸盐,摇动1min,离心为4000 r / minat室温(20-25℃)for5 min.

3. 拿出3ml的上清液,吹到干横核 in50-60℃.

4. Dissolve thedry 残留物IN1 MLN-己烷,添加 1 mL ofthesample Redissolvingsololution,混合30秒; 离心高于4000. r/min 在室温(20-25℃)of5 分钟,去除上层有机相。

5. Take50 µL 分析的下层。

稀释样品的折叠:1

5.4 Egg

1. Take2± 0.05 g 将均化的样品中的50ml离心管.ADD 6mlethyl 醋酸盐,摇匀1分钟,在4000升中离心 r / minat室温(20-25℃)for5 min.

2. 拿出3ml的上清液,吹到干横核 in50-60℃.

3. Dissolve thedry 残留物IN1 MLN-己烷,添加 1 mL ofthesample Redissolvingsololution,混合30秒; 离心高于4000. r/min 在室温(20-25℃)of5 分钟,去除上层有机相。

4. Take50 µL 分析的下层。

稀释样品的折叠:1

(如果在样品制备过程中不能服用3ml上清液,则重复离心机然后采取溶液,或加入10ml乙基 然后服用5ml上清液吹干,稀释因子相同)

 

6. ELISA程序

6.1Instructions 

1 带来所有试剂和 micro-wellstrips to the 室温(20-25 ℃) before use;

2 Return all reagentsto2-8 ℃ immediately after use;

3 The reproducibility 在Alarglegegree的TheElisa分析中,取决于PlantWashing的一致性。 PloutWasking的正确操作是关键点 inELISA theprocedures;

4 对于incubationatonstant温度,所有样品和试剂拇指光曝光,andeach microplate 应由覆盖物密封。 

6.2Operation procedures

1. 从套件中取出所有的所有早期试剂 和PlaceatTheroom温度(20-25 ℃) for at least 30 min. Note that 每个都必须摇动 均匀地混合前使用。

2. 采取所需的微孔 条带和板框架。重新密封 未使用的微孔板,在2-8℃储存,不冷冻。

3. 溶液制备:稀释 40毫升Theconcentrated洗涤 buffer (20 × 浓缩的水浓缩 在1:19(20个20xconcentratedWashing的1部分 缓冲+ 19个部分去离子水),或制备劣质性 needed.

4. Numbering:number 重婚井 Andstandardsolution;应执行每个样本和标准溶液 重复,记录他们的 positions.

5. 加入50μl的Thesampleoraldardsolution粉质 重复孔;然后在最后的Add50中加入每个孔中的50μl酶缀合物 µL 通过手动摇动板,将抗体工作溶液进入每个孔中。用盖膜密封微孔板,And incubate At25 ℃ for 30 min.

6. 倒入液体,用稀释的缓冲液洗涤微孔板 at 250 μl/孔4-5次。每次浸泡 用洗手间缓冲井 for 15-30 sec,flap to dry withabsorbent 纸张(如果之后有宝宝 拍打,用干净的提示切割它们)。

7. Coloration: add50 µL of thesubstrate Asolution and then50 µL of theB 通过手动摇动板,在25时轻轻摇动溶液,溶液轻轻溶液。 ℃ for 15minatdark for coloration.

8. Determination: add50 µL of thestop solution 通过手动摇动板,轻轻地进入每个孔。 thewavelength 在450年的ofmicroplateader nm 确定OD值。 (推荐 阅读OD值 thedual-wavelength 450/630 nm within 5 min).

 

7. Result judgment

There are two methods to 判断结果;第一个是判断的,而第二个是采样的判断。注意到样品的异位值与之相同的相关性 the content of Chloramphenicol.

7.1 定性决定

Checoncentration Range(ng / ml) 可以从比较Theaverigeod值获得 样本与那个 standard soluit.assumingthat OD value ofthe sampleⅠ IS0.3,以及ThesampleⅡ 是1.0,而题为的那些 解决方案是以下:2.243 FOR0PPT,1.816英寸15ppt, 1.415for 45ppt,0.74 for 135ppt,0.313 405ppt 1215ppt为0.155,相应的浓度范围 of thesampleⅠis 405 to1215ppt,以及thesampleⅡ is45 to135ppt.

7.2 定量决定

获得的吸光度值的平均值 average OD 样品的值(b)和标准 解决了它的自由化 FirstStandardSolution的OD值(B0)(0 标准)和持续100%,即

 

吸光度值的百分比=

B

×100%

 B0

B—the average OD 样品的值或标准 solution

B0—the average OD value of the 0ng/mL standardsolution

绘制TheStandard Curvewith With 标准的百分比 解决方案和TheSemilogarithm. Thehellamphenicol的价值 标准化(Ng / ml) Asy-and x轴,分别是从曲线的样本对应的相应反应 副委托Itheraballation. 百分比曲线标准曲线。结果价值序列 乘以相应的稀释折叠,因此充气 obtaining  theChloramphenicol concentration in the sample.

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8. Precautions

1. 治疗温度低于25℃的试剂的静脉曲张,样品不足 to the 室温(20-25 ℃)将导致疏远的OD value.

2. 洗涤过程中微孔板的干燥 将是陪同的 situationsincluding 非线性标准和可重复性的重现性。

3. Mix 每种试剂和反应混合物均匀地洗涤微孔板 彻底,否则会有不可思议的可重复性。

4. 停止解决方案是2 M硫酸溶液,避免 contacting with the skin;

5. 将未使用的微孔板放入Anauto密封袋中以重新密封它。这一物质 andthecolourless 彩色剂是光敏感,因此它们不能直接暴露在光线上。

6. Do not usethe kit 超出iTsexpiry日期 使用试剂盒的稀释或掺假术语将导致变化的变化 and thedetecting OD values. 不要从不同的套件中换成交换 lot numbers touse.

7. 丢弃Thecolouration. 解决方案 这表明了这一点 该解决方案。检测题的价值 溶液1(0 ppb)小于0.5表示其DEGENERATE。

8. The 最佳反应温度25. ℃,温度过高或太低 will result inthe changes 在TheDetingsentivity和od值。

 

9. 存储和满足日期

Storage: store at2-8 ℃, not frozen.

Expiry date: 12个月;生产日期在框中。

注意:如果微孔板的真空包装有泄漏,则使用仍然有效,不影响测试结果,放松使用。

 

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