产品对于鸡肉,猪肉,鸭子

LSY-10065 TrimethoLim ELISA测试套件

Trimethoprim. ELISA Test Kit

目录号LSY-10065

1. Principle

该试剂盒基于间接竞争酶免疫测定,用于检测Trimethokim in the sample. 偶联抗原 are 预涂在微孔条纹上。 Trimethoprim. 在样品和偶联抗原中 预涂在微井条纹上,竞争抗束缚 抗体。在加入酶缀合物后,加入TMB底物用于着色。样品的光密度(OD)值与Trimethokim的负相关性 在里面。将该值与标准曲线和Trimethokim进行比较 随后获得浓度。


2.技术规格

Sensitivity: 0.5 ppb

孵化温度:25℃

Incubation Time: 30min—15min

Detection limit:  

Tissue 5ppb

交叉反应速率:

Trimethoprim 100%

Sulfamerazine  <0.1%

Sulfaquinoxaline  <0.1%

Sulfamethazine  <0.1%

Sulfamonomethoxine  <0.1%

Sulfamethoxazole  <0.1%

Sulfathiazole  <0.1%

磺胺甲氧基吡啶啶 <0.1%

Sulfaguanidine  <0.1%

Sulfadimethoxine  <0.1%

Sulfadiazine   <0.1%

Sulfameter   <0.1%

Recovery rate:

Tissue 60%~120%

3. Components

1

微井条

12条带8个可拆卸

 wells each

2

6×标准解决方案(每次1ml)

0ppb

0.5ppb

1.5ppb

4.5ppb

13.5ppb

40.5ppb

3

酶共轭

7ml

red cap

4

抗体工作解决方案

7ml

blue cap

5

Substrate A

7ml

white cap

6

SubstrateB

7ml

black cap

7

Stop solution

7ml

yellow cap

8

20×浓缩洗涤缓冲液

15ml

white cap

9

20×样品提取物

15ml

yellow cap

10

2×样品提取物

50ml*2

透明盖帽

11

10× sample diluent

10ml

black cap

4.所需的材料但未提供

1) 设备:微孔板读卡器,均化器,振荡器,离心机,平衡(互感互惠0.01g), graduated pipette, incubator.

2) 微型进料:单通道20〜200μL和100〜1000μL,多通道30〜300 µL;

3) Reagents: NaOH.

 

5.样品预处理

Instructions

必须在任何类型的样本预处理之前处理以下几点:

1)只有一次性尖端可用于实验,并且当用于吸收不同的试剂时,必须改变尖端;

2)在实验之前,每种实验设备必须清洁,如果需要,应避免干扰实验结果的污染。

样品预处理前的溶液制备:
1) Sample extract A

1 part of 20×样品提取A + 19部分 deionized water

2)样品提取物B.

1 part of 2×样品提取物B + 1部分 deionized water

3)1M NaOH solution

称重4g NaOH,将去离子水添加至100ml

4)Sample diluent

1 part of 10× sample diluent + 9 parts of deionized water

5.1 Tissue  

1)取2±0.05克 homogenized tissue 将样品成50ml离心管,加入3ml稀释的样品提取物A,摇动3min;

2)然后加入600UL1M NaOH溶液和2.4ml 稀释的样品提取物B,摇动3min;在室温(20-25℃)的4000 r / min以上的离心机5 minutes.

3) Take 200ul 上层透明液体,加入300ul稀释的样品稀释剂,均匀混合;

4)采取50ul以上混合溶液进行分析。

样品稀释折叠:10

 

6.ELISA procedures

 Instructions

1.将所有试剂和微孔条带到室温(20-25℃)。

2.使用后立即将所有试剂送回2-8℃。

3. ELISA分析的再现性,到大程度上取决于一致性 板材洗涤。板材洗涤的正确操作是程序的关键点 ELISA.

4. 为了在恒定温度下孵育,所有样品和试剂必须避免光线 暴露,并且每个酶标器都应密封 the cover membrane.

 操作程序

1. 从套件中取出所有必要的试剂,并在室温(20至25℃)的地方至少30分钟。注意,必须在使用前摇动每种液体试剂以均匀混合。

2. 采用所需的微孔条和板式框架。重新密封未使用的微孔板,储存在2-8℃,不冷冻。

3. 洗涤缓冲剂制备:稀释15 20×浓缩洗涤缓冲液的Ml在1:19在去离子水中(1部分20×浓缩洗涤缓冲液 + 19 parts deionized water )。或准备洗涤缓冲液作为所需的量。

4. 编号:根据样品和标准溶液编号微孔;每个样品和标准溶液应重复进行;记录他们的职位。

5. 加入50μl样品 or 分离重复孔的标准溶液,然后添加50ul酶缀合物 每个孔中50μl抗体溶液。通过手动摇晃板轻轻搅拌,用盖子膜密封微孔板,在25℃下并孵化 for30 minutes.

6. 从微孔中倒出液体,加入250μl/孔的洗涤缓冲液15-30 秒,重复四到五次,然后翻转到干燥(如果拍打后有气泡,用清洁的提示切割它们)。

7. 着色:将50μl基质A和然后将50μl的基板B添加到每个孔中。通过手动摇晃板,轻轻混合,And incubate ab ℃ for15 在黑暗中拍摄着着色。

8. 测定:将50μl止动溶液加入每个孔中。通过手动摇动板轻轻混合。将微孔板读取器的波长设置为450 nm以确定OD值(建议在5分钟内读取双波长450/630 nm处的OD值)。

 

7. Result judgment

有两种方法来判断结果;第一个是粗略的判断力,而第二个是定量确定。注意,样品的OD值与Trimethokim的含量具有负相关性 in the sample.

7.1定性确定

浓度范围(Ng / ml)可以从比较样品的平均OD值与标准溶液的比较获得。假设样品的OD值Ⅰ 是0.3,以及样品Ⅱ 是1.0,而标准解决方案的介绍是如下:2.243 for 0ppb, 1.816 for 0.5ppb, 1.415 for 1.5ppb, 0.74 for 4.5ppb, 0.313 13.5ppb和0.155 对于40.5ppb,因此提取样品的浓度范围13.5 到40.5ppb,以及样品Ⅱ is 1.5 to 4.5ppb.

7.2定量确定

吸光度值的平均值相当于样品的平均OD值(B)的百分比,并将标准溶液除以第一标准溶液(0标准)的OD值(B0),随后乘以100% , 那是,


吸光度值的百分比=

B

×100%

B0

B-样品的平均(双孔)OD值或标准溶液

b0 - 0的平均OD值 ng/mL standard solution

用标准解决方案的吸收百分比和Trimethoprim的半因素值绘制标准曲线 标准溶液(Ng / ml)分别为y和x轴。通过将其吸收百分比掺入标准曲线中,从标准曲线读取样品的相应浓度。随后将得到的值乘以相应的稀释折叠,因此最终获得Trimethoprim 样品中的浓度。

使用此套件的专业分析软件将更方便地对大量样品进行准确和快速分析。 (请联系我们此软件)

 

8. Precautions

1. 房间温度低于25 ℃或试剂的温度和未返回室温(20-25℃)的样品将导致较低的标准OD值。

2. 洗涤过程中的微孔板的干燥度将伴随着包括非线性标准曲线的情况和不期望的再现性。

3. 将每种试剂和反应混合物混合均匀混合并彻底清洗微孔板,否则会有不希望的再现性。

4. 静止溶液是2M硫酸溶液,避免与皮肤接触。

5. 将未使用的微孔板放入自动密封袋中以重新密封。标准物质和无色彩色成形器是光敏感的,因此它们不能直接暴露在光线上。

6. 请勿使用超出其到期日的套件。使用来自试剂盒的稀释剂或掺杂试剂将导致灵敏度的变化和检测到的OD值。不要将试剂从不同批号的套件交换使用。

7. 用任何指示该溶液退化的颜色丢弃着色溶液。 0标准溶液的检测值小于0.5表示其变性。

8. 最佳反应温度为25 ℃,过高或太低的温度会导致检测灵敏度和OD值的变化。

 

9.存储和到期日期

Storage: 存放在2-8℃,不冷冻。

Expiry date: 12个月;生产日期在框中。

注意:如果微孔板的真空包装有泄漏,则使用仍然有效,不影响测试结果,放松使用。


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